Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患儿进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现人纤内自身HIV到显现1标准型癌症流行病学疼痛的的发展部将在幼儿时期就有很好的描绘，多个人纤内自身HIV基本特征性的幼儿里有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的幼儿这一数量增大到84%。相较来说之下，分之二流行病学1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的胃癌机制还从未得到充分的深入研究。

越来越多的人开始可用分期系统来定义1标准型癌症的的发展：生物纤在显现多种人纤内自身HIV时离开第1前期，显现血糖异常时离开第2前期，显现疼痛时离开第3前期。一些多发人纤内自身HIV基本特征性的生物纤，在1期和2期，的发展极快，并发展为胃癌的1标准型癌症。我们此前描绘了四组成员在首次检查和到多种人纤内自身HIV样品后至寡10年无癌症的太快的发展者，这组成员病患000人寡，但基本特征极为完全一致。随后，我们推测人纤内自身上皮细胞特异性CD8+T细胞膜底物将在的发展极快的病患里基本不不存在，但在近来胃癌和依然不存在的癌症病患里很容易检查和到。这意味著证明，与的发展病患相较来说，这些病患自身免疫底物将的缓冲提升。

早期深入研究证明，尽管缓冲性T细胞膜(Treg)数量正常，但癌症病患不存在一些功能原因，其里包括对IL-2的底物将潜能增大。此外，癌症病患里的不稳定性将CD4+T细胞膜意味著对缓冲更为重要抵抗性，展现为不稳定性将T细胞膜的选择性逼近，自然产生的Treg和纤外产生的其会Treg，以及上皮细胞个人经历的CD4+T细胞膜里IL-2底物将逼近。本深入研究的目的是描绘了CD4+缓冲性T细胞膜(Treg)在在在极极快的发展者里的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法有：BOX深入研究是一项以成年人为基础的纵向深入研究，在21岁都有肺炎的病患亲属里检查和1标准型癌症的危险性因素。我们此前描绘了依然极快的发展者的基本特征，他们依然多重人纤内自身HIV基本特征性高达10年，但从未显现癌症的流行病学疼痛，较为慢性或非完成性自身免疫。随后，10名之后依然无癌症并愿意备有大量肝脏样品的极快的发展者纳入T和B细胞膜功能系统性。在现在的深入研究里，8名较为慢的发展者(SP组成员)，里位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的人纤内自身HIV基本特征性。所有的自发性都始终保持1标准型癌症的发展的1期，尽管一些人随后保住了人纤内自身HIV对某些上皮细胞的基本特征性底物将，然而，一名病患已经始终保持2期至寡6年，但从未显现流行病学疼痛，一名病患被检验为癌症，该成年人72岁，在收集检验样品时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性里对该ADP完成了原则上风险评估。裂解外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多值流式细胞膜奥义和T细胞膜选择性试验风险评估ADP里Treg的频部将、表标准型和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、密切方面和回归)完成无委派聚类系统性，风险评估Treg表标准型。

结果：与身体健康ADP相较来说，来自较为慢的发展纤的遗忘CD4+T细胞膜的委派聚类结果显示，酪氨酸的遗忘CD4+ Treg频部将增大，与糖皮质激素其会的TNFR方面受体(GITR)凸显增大有关。一名HbA1c消退的病患与的发展极快者和转换的检验组成员相较来说，Treg小曲大同小异。功能系统性证明，与身体健康ADP相较来说，来自极快的发展纤的Treg酪氨酸的CD4+不稳定性将T细胞膜选择性明显受损。展现为对不稳定性将CD4+T细胞膜CD25和CD134凸显的选择性增大。

上图1 系统地的表标准型系统性结果显示，CD4+Treg亚标准型在较为慢的发展字段里增大。由FlowSOM分解成的Treg四楼，周围在来自所有ADP的已逝CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示出新物凸显确认出新10个元簇:遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)可用9个不同Treg标示出新分解成的10个元簇的MST。每个路由表代表一个集群(100个集群)，极大的元集群(10个元集群)在路由表组成员周围上色。每个路由表里的饼上图透露单个标示出新的凸显层级。(b)每个元聚类的热上图，以结果显示整纤标示出新凸显。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解成上图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较原子量为每个metacluster装有两条路线上图(原子量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞膜(l)。浅深蓝色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核查。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 可用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频部将的增大是的发展极快的徽标。PG奈斯(a - f)和大豆系统性(g-k)较为SP自发性和转换的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异性。(a)表标准型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR凸显完成裂解，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(白点)组成员以及ADPSP 606(浅深蓝色)里CD25+ cd127的频部将统计上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯同构的装有两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)甜菜簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3凸显强度着色，斜线引人注目的簇被辨识为SP和HD字段二者之间的不同。(j)装有两条路线上图结果显示了在SP(白点)和HD(灰点)组成员里，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较原子量(数量)。(k)上图表结果显示每个簇的表标准型(暗红色)和Treg标示出新相较凸显与背景凸显(深蓝色);上列，缓存Treg_3;比如说动身，缓存Treg_4。背景与所有其他簇里标示出新的凸显有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核查

上图3 与身体健康献血者相较来说，的发展极快者遗忘treg的GITR增大。每个遗忘CD4+T细胞膜元簇(遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查和每个凸显标示出新的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的凸显热上图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里所有HD(暗红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅深蓝色)的FlowSOM GITR凸显串联，结果显示上图表(c)和统计上图(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和核查，p< 0.07(浅深蓝色)所有ADP包括，p< 0.05(深蓝色)ADPSP 606和转换的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR凸显，从PG奈斯，从所有HD(暗红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅深蓝色)串联，结果显示上图表(e)和统计上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩核查

上图4 来自极快的发展的CD4+ treg细胞膜控制不稳定性将CD4+T细胞膜的潜能增大。SP组成员用深蓝色的两条路线和左上角透露，HD组成员用金色的两条路线和左上角透露，浅深蓝色的两条路线/左上角透露ADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(应将答者)被标示出新为CFSE, Treg按观察的数量底物物。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，培养出新来3当晚完成流式细胞膜奥义检查和。(a-d)与CD4+应将答者相较应将的treg培养出新来(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者培养出新来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比率。可用基本特征性对照(酪氨酸的响应将细胞膜都有treg)计算选择性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

上图5 不稳定性将CD4+T细胞膜对极快的发展的T细胞膜还原的选择性更敏感。SP组成员用深蓝色的两条路线和左上角透露，HD组成员用金色的两条路线和左上角透露，浅深蓝色的两条路线/左上角透露ADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标示出新，treg按观察的数量底物物。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，培养出新来3当晚完成流式细胞膜奥义(CD25反染)和细胞膜因叔父系统性。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同培养出新来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分部将(b)。(c,d) CD25选择性百分部将(c)和CD134选择性百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大出新来里的凸显。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

假设：我们得出新的假设是，来自极快的发展叔父的还原遗忘CD4+Treg在GITR凸显里得到了扩展和珍贵，凸显了进一步深入研究Treg在1标准型癌症不确定性生物纤里的异质性的必要。

标题出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28