Diabetologia：激活但功能受损的思绪Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失胰脏自身抗棒状到消失1HG肾病临床症状的困难重重亲率在婴幼儿时期就有极佳的描述，多个胰脏自身抗棒状非典HG的婴幼儿之前有70%在血浆转换后10年内肺结核肾病，而随访15年的婴幼儿这一%-缩减到84%。相较之下，占临床1HG肾病一半以上的HG1HG肾病的胃癌机制还不会得到充分的数据分析。

越来越多的人开始运用于分期系统来定义1HG肾病的困难重重：个棒状在消失多种胰脏自身抗棒状时带入第1先决条件，消失血糖消失异常时带入第2先决条件，消失症状时带入第3先决条件。一些多发胰脏自身抗棒状非典HG的个棒状，在1期和2期，困难重重速度更慢，并发展为胃癌的1HG肾病。我们前描述了都由在首次探测到多种胰脏自身抗棒状试样后最少10年无肾病的极更慢困难重重者，这组患者人数少，但特质非常明确。随后，我们发掘出胰脏自身抗原特异性CD8+T肝细胞重排在困难重重极快的患者之前基本不存在，但在近期胃癌和长期存在的肾病患者之前很容易探测到。这可能表明，与困难重重患者相较，这些患者诱发重排的平衡增强。

早期数据分析表明，尽管平衡性T肝细胞(Treg)数量正常，但肾病患者存在一些功能缺陷，其之前包含对IL-2的重排能够减缓。此外，肾病患者之前的effectCD4+T肝细胞可能对平衡极具抵抗性，发挥为effectT肝细胞的抑制作用减更慢，其本质显现出的Treg和棒状外显现出的游离Treg，以及抗原随之而来的CD4+T肝细胞之前IL-2重排减更慢。本数据分析的借以是描述了CD4+平衡性T肝细胞(Treg)在一小群极极快困难重重者之前的特质，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX数据分析是一项以人群为了将的纵向数据分析，在21岁以下确诊的患者亲人之前检查1HG肾病的危险考量。我们前描述了长期极快困难重重者的特质，他们持续保持多重胰脏自身抗棒状非典HG高达10年，但不会消失肾病的临床症状，更慢性或非顺利进行性诱发。随后，10名继续持续保持无肾病并愿意备有大量血液试样的极快困难重重者纳入T和B肝细胞功能统计分析。在现在的数据分析之前，8名更慢困难重重者(SP组)，之前位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身抗棒状非典HG。所有的参与者都处于1HG肾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗棒状对某些抗原的非典HG重排，然而，一名患者已经处于2期最少6年，但不会消失临床症状，一名患者被病症为肾病，该受试者72岁，在搜集试验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之前对该供棒状顺利进行了单独风险评估。分离外周血单个连锁反应以肝细胞(PBMCs)，改用多参数流式肝细胞忍术和T肝细胞抑制作用试验风险评估供棒状之前Treg的kHz、表HG和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和复归)顺利进行无监督聚类统计分析，风险评估Treg表HG。

结果：与肥胖供棒状相较，来自更慢困难重重棒状的遗忘CD4+T肝细胞的监督聚类显示，激活的遗忘CD4+ TregkHz缩减，与组胺游离的TNFR相关亚基(GITR)理解缩减有关。一名HbA1c升高的患者与困难重重极快者和匹配的对照组相较，Treg序有所多种不同。功能统计分析表明，与肥胖供棒状相较，来自极快困难重重棒状的Treg诱导的CD4+effectT肝细胞抑制作用值得注意受损。发挥为对effectCD4+T肝细胞CD25和CD134理解的抑制作用缩减。

所示1 深入的表HG统计分析显示，CD4+Treg共通点在更慢困难重重字段之前缩减。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有供棒状的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上标物理解鉴定出10个元簇:遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个多种不同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个结点值得一提的是一个战斗群(100个战斗群)，相当大的元战斗群(10个元战斗群)在结点组远处制做。每个结点之前的饼所示问到单个上标的理解级别。(b)每个元聚类的热所示，以显示整棒状上标理解。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成所示，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的沙质。(e-l)相对于丰度为每个metacluster装该线所示(丰度> 0.05%)确认为HD和SP组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T肝细胞(l)。橙色格子值得一提的是慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 运用于CITRUS的预测模HG证实，TregkHz的缩减是困难重重极快的标志。分级门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的值得一提的是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行分离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(环纹)和SP(杂色)组以及供棒状SP 606(橙色)之前CD25+ cd127的kHz汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出的簇被识别系统为SP和HD字段之间的多种不同。(j)装该线所示显示了在SP(杂色)和HD(灰点)组之前，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于丰度(%-)。(k)控制点显示每个簇的表HG(粉红色)和Treg上标相对于理解与或多或少理解(白色);上列，磁盘Treg_3;下面正要，磁盘Treg_4。或多或少与所有其他簇之前上标的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与肥胖献血者相较，困难重重极快者遗忘treg的GITR缩减。每个遗忘CD4+T肝细胞元簇(遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个理解上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的理解热所示(sp606不包含在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR理解组合成，显示控制点(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供棒状包含，p< 0.05(白色)供棒状SP 606和匹配的HD不包含在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(橙色)组合成，显示控制点(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自极快困难重重的CD4+ treg肝细胞控制effectCD4+T肝细胞的能够减缓。SP组用白色的该线和格子问到，HD组用黑色的该线和格子问到，橙色的该线/格子问到供棒状sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被上标为CFSE, Treg按检视的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，指导3天后顺利进行流式肝细胞忍术探测。(a-d)与CD4+此番者相对于应以的treg指导(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用总和。运用于非典HG对照(激活的作出反应以肝细胞不含treg)计算抑制作用总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 effectCD4+T肝细胞对极快困难重重的T肝细胞活化的抑制作用更敏感。SP组用白色的该线和格子问到，HD组用黑色的该线和格子问到，橙色的该线/格子问到供棒状sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel上标，treg按检视的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，指导3天后顺利进行流式肝细胞忍术(CD25反染)和肝细胞因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分亲率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分亲率(c)和CD134抑制作用百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之前的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推断的结论是，来自极快困难重重子的活化遗忘CD4+Treg在GITR理解之前得到了扩展和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1HG肾病风险个棒状之前的一般而言的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28